همه آنچه که باید درباره محیط کشت tsi بدانید

تفسیر محیط کشت tsi

محیط کشت (به انگلیسی: Growth medium)  یک محیط مایع یا ژلی است که برای رشد جوانه ها ، سلول ها یا حتی گیاهان کوچک استفاده می شود. محیط‌های کشت به صورت کلی به دو دسته تقسیم می شوند: کشت یاخته (به انگلیسی: cell culture) که در آن از یاخته‌های خاصی مصرف می‌شود که از گیاهان و حیوان‌ها به وجود آمده میباشد و کشت خردزیستی (به انگلیسی: microbiological culture) که به صورت مخصوص به سبب رشد دادن میکروب‌ها مصرف می‌گردد.

محیط کشت مالت اکسترکت آگار

محیط کشت tsi

محیط کشت TSI یک محیط جامد و افتراقی است و برای تشخیص باکتری های روده (خانواده Enterobacteriaceae) استفاده می شود.

محیط کشت سه گانه آهن شیرین یا محیط کشت tsi یک محیط کشت است که

به دلیل توانایی آن در آزمایش توانایی میکروارگانیسم ها در تخمیر قندها و تولید سولفید هیدروژن نامگذاری شده است.

اکثر باکتری ها توانایی تخمیر کربوهیدرات ها ، به ویژه قندها را دارند.

محیط کشت tsi چیست

کشت سلولی ، که از سلولهای مخصوص مشتق شده از گیاهان و حیوانات استفاده می کند ، و محیط کشت میکروبیولوژیکی ، که به صورت منحصر به فرد برای رشد کشت می شود.

محیط کشت Mrvp Medium

محیط کشت میکروبی فرآیندی است که باکتری ها را در شرایط مناسب قرار می دهد تا بتواند رشد و تکثیر کند. میکروب ها موجودات تک سلولی میباشند ، یعنی همه عملکردهای حیاتی را به طور مستقل و بدون نیاز به سلول دیگر انجام می دهند. جوانه ها همچنین به غذا ، آب و مواد مغذی نیاز دارند.

محیط کشت میکروبی یک محیط کاملاً مغذی است که حاوی همه چیزهایی است که یک باکتری برای رشد به آن نیاز دارد ، مانند غذا ، آب ، اکسیژن و غیره. در این مقاله سعی شده است توضیحی مختصر و کاربردی ارائه شود

.محیط کشت MALT AGAR

انواع محیط کشتها از لحاظ فیزیکی

یک محیط کشت میکروبی یک محیط کاملاً مغذی است که حاوی همه چیزهایی است که یک باکتری برای رشد به آن نیاز دارد ، مانند غذا ، آب ، اکسیژن و غیره. در این مقاله سعی شده است توضیحی مفید و کاربردی ارائه شود.

محیط کشت gn

محیط کشت مغذی

از آن برای رشد باکتری ها استفاده می شود و حاوی موادی مانند آب ، نمک ها ، مواد کربنی مانند گلوکز و اسیدهای آمینه است.

محیط کشت مغذی محیطی است که بدون در نظر گرفتن جنس یا گونه ، رشد بسیاری از میکروارگانیسم های متفاوت را افزایش می دهد.

محیط کشت کمینه

تنها با هدف رشد جرگه میکروبی مورد استفاده قرار می‌گیرد و دارای کمترین میزان مواد خوراکی و بیشترین میزان عناصر حیاتی می‌باشد و نیز دارای هیچگونه آمینو اسیدی نمی‌باشد.

محیط کشت اختصاصی

برای رشد ویژه از نوع خاصی از میکروب استفاده می شود و در این محیط کشت از رشد سایر موجودات جلوگیری می شود.

محیط کشت جامد

محیط کشت جامد (Solid Media): این محیط کشت حاوی آگار است که باعث انعقاد و جامد شدن محیط کشت می شود. از این محیط کشت برای مطالعه ویژگیهای باکتریایی ، تشکیل کلونی ، تعداد باکتریها و غیره استفاده می شود که می توان آنها را هم در ظروف بشقابی و هم در لوله های آزمایش آماده کرد. نمونه ای از نوترین آگار

محیط کشت نیمه جامد

محیط کشت نیمه جامد (semisolid Media): این محیط ها حاوی درصد کمی آگار ، به عنوان مثال نیم درصد ، و نیمه جامد باقی می مانند. آنها به عنوان یک پشتیبان انتقالی استفاده می شوند. به عنوان سیم کارت

محیط کشت مایع

محیط کشت مایع (Liquid Media ): (رسانه مایع) این محیط کشت عاری از آگار است ، بنابراین مایع است و در لوله آزمایش یا فلاسک تهیه می شود و برای رشد باکتری ها و مطالعه فرایند تخمیر استفاده می شود. مانند نوترینت براث

محیط کشت تی اس آی TSI

انواع محیط کشت از لحاظ کاربرد در آزمایشگاه :

محیط کشت پایه

محیط کشت پایه ( Basic media ): اساس ساخت انواع مختلف محیط رشد ، محیط اصلی رشد است که کمترین میزان مواد مغذی را دارد. این محیط برای رشد میکروب هایی مناسب است که برای رشد و تکثیر آنها نیازی به محیط های تخصصی ندارند. این محیط برای رشد انواع مختلف سلول ها مناسب است. محیط کشت جدیدترین آگار این نوع محیط کشت است.

محیط کشت غنی شده

محیط کشت غنی شده (Enriched Media): این محیط کشت ها با افزودن خون یا سرم به محیط ساده تهیه می شوند. این رسانه ها می توانند رشد تعدادی از باکتری های ضروری مانند آگار خون یا سرم لفلر را برای کشت باسیل دیفتری امکان پذیر کنند.

محیط کشت انتخابی

محیط کشت انتخابی (Selective Media): مکانیسم عمل این محیط کشت به گونه ای است که با استفاده از یک مهار کننده ، بجز ارگانیسم مورد نظر ، رشد سایر ارگانیسم ها مهار می شود. به همین دلیل ، نام انتخاب شده برای این رسانه فرهنگی استفاده می شود. این محیط کشت قادر به رشد یک ارگانیسم واحد است ، این محیط کشت در مواردی استفاده می شود که رشد برای سایر موجودات مضر است.

محیط کشت افتراقی tsi

محیط افتراقی (Differential Media): این محیط کشت یک محیط کشت تشخیصی است و به دلیل وجود ترکیبات خاص و مواد ضد میکروبی در اجزای آن ، باعث تمایز و جداسازی باکتری ها می شود. مانند محیطهای M.C و EMB ، این محیطها حاوی نمکهای صفراوی - قند - مواد شیمیایی هستند که بر روی آنها باکتریهای لاکتوز مثبت یک مستعمره صورتی تشکیل می دهند و مستعمرات منفی لاکتوز مانند سالمونلا و شیگلا یک مستعمره سفید را تشکیل می دهند. برای تمایز و تشخیص میکروبها در هنگام رشد استفاده می شود و دارای آشکارسازهایی مانند قرمز خنثی ، ائوزین ، متیلن بلو و غیره است. محیط کشت افتراقی به چندین مدل باکتری اجازه رشد می دهد ، اما حاوی ترکیباتی می باشد که به میکروب ها (یا حتی گونه ها) اجازه می دهد از نظر بصری متفاوت باشند.به این ترتیب ، ارگانیسم یا گونه موردنظر با ترکیبات اضافه شده (مانند قندها) واکنش نشان می دهد و باعث می شود از نظر بصری از سایر انواع باکتری های موجود در یک صفحه قابل تشخیص باشد. استفاده از محیط کشت افتراقی به محققان این امکان را می دهد تا به سرعت موجوداتی را که برای مطالعه محیطهای بسیار مخلوط مانند مدفوع مهم هستند ، شناسایی کنند.

محیط کشت ترابری

محیط کشت ترابری (Transport Media): وقتی نمونه های کشت آماده می شوند ، از این محیط های کشت برای انتقال به آزمایشگاه استفاده می شود. زیرا در حین انتقال نمونه ها ممکن است خشک شوند یا باکتری های ناخواسته رشد کنند یا نمونه عفونی شود. علاوه بر این ، با افزودن زغال ، از رشد باکتری های ناخواسته جلوگیری می کنیم. این فقط به منظور حفظ موجودات نمونه و برای جابجایی یا ذخیره آن استفاده می شود ، که در آن از رشد موجودات نمونه و سایر موجودات جلوگیری می شود. مثال کری بلر

محیط کشت کامل

محیط کشت کامل  :(Complete Media) این نوع محیط کشت دارای تمام مواد لازم برای رشد باکتری است و حاوی مواد ضد میکروبی ، مهار کننده ها و شاخص ها نیست ، یعنی با رشد باکتری های مختلف روی آن ، هیچ تغییر رنگی مشاهده نمی شود و حدود 80 درصد باکتریها در آنجا رشد می کنند. آگار خون و شکلات آگار متداول ترین نمونه های کشت غنی شده هستند که به آنها افزودنی هایی اضافه می شود ، مانند خون گوسفند غیر قابل تثبیت که در آگار خون مصرف می شود. نمونه ای از محیط کشت کانت آگار صفحه P.C.A

محیط کشت تی اس آی

این یک محیط کشت است که به دلیل توانایی آن در آزمایش توانایی میکروارگانیسم ها در تخمیر قندها و تولید سولفید هیدروژن نامگذاری شد. اکثر باکتری ها توانایی تخمیر کربوهیدرات ها ، به ویژه قندها را دارند. در این مدت ، هر باکتری فقط می تواند قندهای خاصی را تخمیر کند. به آرامی ، در حالی که نمی تواند بقیه را تخمیر کند ، قندهایی که باکتری ها می توانند تخمیر کنند و قندهایی که نمی توانند مشخصه باکتری ها باشند ، معیار مهمی برای شناسایی آن هستند.

طرز تهیه محیط کشت tsi

محیط کشت‌، ابزاری با ارزش در میکروبیولوژی

محیط کشت آزمایشگاهی محیط جامد ، نیمه جامد یا مایع است که حاوی مواد مغذی برای رشد میکروارگانیسم های مختلف است و شرایط لازم برای رشد آنها را فراهم می کند. میکروارگانیسم های مختلف برای رشد نیاز به شرایط متفاوتی دارند. به همین دلیل ، از رسانه های مختلف فرهنگی برای پرورش آنها استفاده می شود. محیط کشت اولیه برای میکروبیولوژی بالینی به 3 دسته اصلی تقسیم می شود. محیط های تغذیه ای ، متفاوت و انتخابی. در این مقاله ، ما قصد داریم این سه نوع رسانه رو به رشد را مرور کرده و نمونه هایی را ارائه دهیم. بنابراین اگر کنجکاو هستید که کدام محیط کشتی برای رشد میکروارگانیسم های موردنظر شما مناسب است ، با ما همراه باشید.

وجود سرم در محیط کشت :

سرم به عنوان منبع اکثر مواد لازم برای رشد و تکثیر سلولی مانند اسیدهای آمینه ، پروتئین ها ، ویتامین های محلول در چربی (A ، D ، K ، E) ، اسیدهای چرب ، قندها ، هورمون ها (برای عملکرد بهتر سلول ها) ، مواد معدنی (سدیم ، پتاسیم) ، عناصر کمیاب (روی ، آهن و ...) و عوامل رشد اجزای اصلی محیط رشد هستند. سرم به عنوان بافر pH محیط رشد را ثابت نگه می دارد.محیط کشت Drbc Agar

محیط tsi

گاهی اوقات استفاده از سرم مضراتی دارد. به عنوان مثال ، ترکیبات سرمی همیشه پایدار نیستند و قبل از استفاده باید از نظر ترکیبات بررسی شوند. حتی ممکن است حاوی عوامل خاصی باشد که مانع از رشد سلول ها و باعث آلودگی محیط می شود. استفاده از سرم همچنین باعث جداسازی فرهنگ ها می شود.

نحوه کشت در محیط tsi

عناصر و ترکیبات تشکیل دهنده محیط های کشت :

کربن در کربو هیدرات :

منبع کربن کربوهیدرات ها یا قندها هستند که وظیفه تأمین انرژی سلول را بر عهده دارند. نوع قند مورد استفاده برای انرژی در محیط های رشد به توانایی سلول در استفاده از قندها بستگی دارد. در برخی از محیطها از گلوکز و گالاکتوز و در برخی دیگر از مالتوز استفاده می شود.

آمینو اسیدها :

آمینو اسیدها چون برای ساخت پروتئین ها لازم است در همه محیط های رشد موجود است. سلول ها برای رشد خود به انواع آمینو اسیدها نیاز دارند که برخی از آن ها را خودشان تولید می کنند و برخی دیگر را از محیط کشت تامین می کنند.

لیپید ها و اسید های چرب :

چون سرم ها حاوی اسیدهای چرب هستند پس اضافه کردن اسیدهای چرب در محیط های سرم دار لازم نیست. در محیط بدون سرم برای رشد سلول باید لیپید اضافه شود.

ویتامین ها :

ویتامین ها باعث رشد و تکثیر سلولی می شوند. از آنجا که ویتامین ها توسط سلول ها ساخته نمی شوند ، باید به محیط کشت اضافه شوند. در محیط کشت حاوی سرم ، ویتامین های محلول در چربی در محیط وجود دارند و نیازی به افزودن ندارند.

نمک های غیرآلی :

سلولهای موجود در محیط رشد باید با یکدیگر ارتباط برقرار کنند و این امر از طریق غشاء انجام می شود که باید غلظت محلول نمکی را تنظیم کند. با افزودن یون هایی مانند سدیم ، پتاسیم و کلسیم به شکل نمک های معدنی ، تعادل اسمزی حفظ شده و پتانسیل غشای سلولی تنظیم می شود.

رنگ فنول رد :

رنگ ها به عنوان شناساگر PH و ناظر بر تنظیم آن هستند و رنگ آن ها متناسب با مواد رها شده توسط سلول ها تغییر می کند. در PH های پایین رنگ محیط زرد و در PH های بالا رنگ بنفش و در بهترین شرایط رشد باکتری، محیط قرمز است.

سیستم بافری :

بافر به عنوان تنظیم کننده pH نقش مهمی در رشد سلول ها ایفا می کند. یکی از راههای تنظیم اسیدیته که بسیار ارزان نیز هست ، استفاده از دی اکسید کربن است که از ترکیبات کربناته محیط رشد آزاد می شود و سیستم بافر طبیعی و غیر سمی است. HEPES سیستم دیگری است که نیازی به گازهای جوی ندارد و یک سیستم شیمیایی کم هزینه با زویتریون است.

عناصر کمیاب و مکمل های محیط کشت :

عناصری مانند روی ، مس ، سلنیوم و… به محیطهای بدون سرم اضافه می شوند. وجود این عناصر برای فرآیندهایی مانند تولید آنزیم ها ضروری است. محیط کشت کامل باید حاوی مکمل هایی باشد که در محیط پایه و سرم وجود ندارد. به این محیطهای رشد ، که برای رشد و تکثیر سلولهای خاص لازم است ، ترکیباتی مانند هورمونها و عوامل رشد (با احتیاط) اضافه می شود.

آنتی بیوتیک ها :

هنگامی که آلودگی قارچی و باکتریایی در محیط در حال رشد وجود داشته باشد ، از آنتی بیوتیک ها استفاده می شود. استفاده بیش از حد از آنتی بیوتیک ها متابولیسم سلول های حساس را مختل کرده و آلودگی باکتری های مقاوم را پنهان می کند.

محیط کشت (MY 40 AGAR (OSMOPILIC AGAR

کاربرد محیط کشت tsi

محیط های کشت پر کاربرد :

محیط های رشد مورد استفاده برای رشد میکروارگانیسم ها فراوان است. در اینجا چند نمونه آورده شده است.

کشت در محیط tsi

آزمایش آهن قند سه گانه (TSI) یک آزمایش میکروبیولوژیکی است که توانایی میکروارگانیسم ها را در تخمیر قندها و تولید سولفید هیدروژن بررسی می کند. این آزمایش اغلب برای تمایز بین باکتری های روده ، از جمله سالمونلا و شیگلا استفاده می شود.

ترکیبات محیط کشت tsi

شیب TSI یک لوله آزمایش حاوی آگار ، رنگ حساس به pH (فنل رد شده) ، 1٪ لاکتوز ، 1٪ ساکارز ، 0.1٪ گلوکز و تیوسولفات سدیم و سولفات آهن یا سولفات آهن آمونیوم است.

محدودیت های محیط کشت آگار TSI

برای شناسایی کامل، انجام آزمایش بیوشیمیایی، ایمونولوژیک، مولکولی یا طیف سنجی جرمی بر روی کلنی های به دست آمده از کشت خالص توصیه می شود.
مهم است که فرآیند پریک برای این روش انجام شود و اگر این اتفاق نیفتد نتایج آزمایش اعتبار خود را از دست می دهد. به طور خلاصه، فرآیند نیش زدن شامل حذف باکتری ها از آگار با یک حلقه یا نوک سوزن و قرار دادن آن در عمق آگار است. همچنین مهم است که آگار ساختار یکپارچه خود را در طول فرآیند تثبیت از دست ندهد. در حین انجام این تست باید درپوش ها شل شوند، در غیر این صورت نتایج اشتباهی رخ می دهد.
آگار TSI باید در طول دوره انکوباسیون 18-24 ساعته خوانده شود. اگر خیلی زود خوانده شود، ممکن است یک واکنش مثبت کاذب مشاهده شود. اگر بعد از 24 ساعت خوانده شود، ممکن است یک واکنش منفی کاذب مشاهده شود.
ارگانیسمی که سولفید هیدروژن تولید می کند می تواند تولید اسید را در اعماق محیط بپوشاند. با این حال، تولید سولفید هیدروژن نیاز به یک محیط اسیدی دارد، بنابراین قسمت لب به لب باید اسیدی در نظر گرفته شود.
TSI در مقایسه با سایر رسانه های حاوی آهن مانند محیط ایندول سولفید (SIM) به تشخیص سولفید هیدروژن حساس نیست.
برخی از گونه‌ها یا سویه‌ها ممکن است واکنش‌های تاخیری ایجاد کنند یا کربوهیدرات‌ها را به‌طور کامل تخمیر نکنند.

طرز ساخت محیط کشت tsi

همه این مواد با حرارت ترکیب شده و استریل می شوند و در نهایت لوله حاوی محیط به صورت مور یا شیب قرار می گیرد تا محتویات را سخت کند و محیط ظرف دارای عمق و سطح شیب دار است. شکل مایل محیط امکان کشت باکتری های هوازی و بی هوازی را بر روی این محیط فراهم می کند. این بدان معناست که این محیط درجات مختلفی از اکسیژن را تأمین می کند.

محیط TSI agar بر اساس محیط آگار آهن Kligler ساخته شده است ، اما قند ساکارز برای آزمایش باکتری های تخمیر کننده ساکارز به آن اضافه شده است.