طرز تهیه بافر فسفات

بافر فسفات سالین (PBS) یک محلول بافری پرکاربرد در تحقیقات زیستی و بیوشیمیایی است. این محلول به دلیل سازگاری با سلول‌ها و حفظ pH در محدوده فیزیولوژیک، در طیف گسترده‌ای از آزمایش‌ها مورد استفاده قرار می‌گیرد. در این مقاله، به بررسی جامع کاربردها، نحوه تهیه، نکات کلیدی و مزایای استفاده از قرص‌های بافر PBS می‌پردازیم.

بخش اول: معرفی و اهمیت PBS

• PBS چیست؟

  • PBS یک محلول نمکی است که معمولاً شامل سدیم کلرید (NaCl)، سدیم فسفات (Na₂HPO₄)، پتاسیم کلرید (KCl) و پتاسیم فسفات (KH₂PO₄) است.

  • این محلول به حفظ pH در محدوده 7.4 (pH فیزیولوژیک) کمک می‌کند، که برای بسیاری از آزمایش‌های زیستی ضروری است.

  • PBS به دلیل ایزوتونیک بودن (داشتن غلظت نمک مشابه با سلول‌ها)، از آسیب به سلول‌ها جلوگیری می‌کند.

• اهمیت PBS در تحقیقات زیستی:

  • PBS به عنوان یک بافر شستشو در کشت سلول، ایمونولوژی و سایر آزمایش‌های زیستی استفاده می‌شود.

  • این محلول برای رقیق‌سازی نمونه‌ها، تهیه محلول‌های استاندارد و حل کردن مواد شیمیایی کاربرد دارد.

  • PBS در روش‌های ایمونوهیستوشیمی، وسترن بلاتینگ و الایزا نقش مهمی ایفا می‌کند.

بخش دوم: کاربردهای متنوع PBS

• کشت سلول:

  • شستشوی سلول‌ها قبل از جداسازی یا شمارش

  • رقیق‌سازی سلول‌ها برای انتقال یا آزمایش

  • تهیه محیط کشت سلول

• ایمونولوژی:

  • شستشوی آنتی‌بادی‌ها و آنتی‌ژن‌ها در الایزا

  • رقیق‌سازی آنتی‌بادی‌ها برای ایمونوهیستوشیمی

  • آماده‌سازی نمونه‌ها برای فلوسیتومتری

• بیوشیمی:

  • رقیق‌سازی پروتئین‌ها و سایر مولکول‌های زیستی

  • تهیه محلول‌های استاندارد برای آزمایش‌های طیف‌سنجی

  • حل کردن مواد شیمیایی برای آزمایش‌های مختلف

• سایر کاربردها:

  • شستشوی بافت‌ها و نمونه‌های بیولوژیکی

  • تهیه محلول‌های بافری برای آزمایش‌های DNA و RNA

بخش سوم: نحوه تهیه محلول PBS

• روش سنتی:

  • تهیه محلول PBS از مواد شیمیایی خالص شامل مراحل وزن کردن دقیق، حل کردن در آب مقطر و تنظیم pH است.

  • این روش زمان‌بر است و نیاز به دقت بالا دارد.

• استفاده از قرص‌های بافر PBS:

  • قرص‌های بافر PBS حاوی مقادیر دقیق مواد شیمیایی هستند.

  • تهیه محلول با حل کردن قرص‌ها در مقدار مشخصی آب مقطر انجام می‌شود.

  • این روش سریع، آسان و دقیق است و خطر خطا را کاهش می‌دهد.

• مزایای استفاده از قرص‌های بافر PBS:

  • صرفه‌جویی در زمان و کاهش خطای انسانی

  • دقت بالا در تهیه محلول با غلظت و pH دقیق

  • حمل و نگهداری آسان

  • کاهش خطر آلودگی

• نکات مهم در تهیه محلول PBS:

  • استفاده از آب مقطر با کیفیت بالا

  • تنظیم دقیق pH با استفاده از pH متر

  • استریل کردن محلول برای کاربردهای حساس

نحوه استفاده از قرص بافر فسفات سالین

مواد مورد نیاز:

• قرص‌های PBS (موجود در بازار)

• آب مقطر یا آب دیونیزه

• یک بشر یا ارلن تمیز

• همزن مغناطیسی (اختیاری)

• pH متر (اختیاری)

• استوانه مدرج یا بالن حجم‌سنج

مراحل تهیه محلول PBS:

۱. مطالعه دستورالعمل بسته‌بندی قرص PBS:

فرمولاسیون قرص‌های PBS ممکن است بین برندهای مختلف متفاوت باشد، بنابراین همیشه راهنمای تولیدکننده را برای حجم مناسب آب در هر قرص بررسی کنید.

۲. اندازه‌گیری حجم مناسب آب:

اکثر قرص‌های PBS برای حل شدن در ۱۰۰ میلی‌لیتر، ۵۰۰ میلی‌لیتر یا ۱ لیتر آب مقطر طراحی شده‌اند تا محلول ۱X PBS ایجاد کنند. برای دقت بیشتر، از استوانه مدرج یا بالن حجم‌سنج استفاده کنید.

۳. حل کردن قرص در آب:

• قرص PBS را در بشر یا ارلن حاوی آب اندازه‌گیری‌شده قرار دهید.

• به آرامی با یک میله شیشه‌ای هم بزنید یا از همزن مغناطیسی استفاده کنید تا قرص کاملاً حل شود. این فرآیند معمولاً چند دقیقه طول می‌کشد.

۴. بررسی و تنظیم pH (اختیاری):

• pH محلول PBS معمولاً حدود ۷.۴ است، اما در صورتی که نیاز به کنترل دقیق باشد، مقدار pH را با pH متر اندازه‌گیری کنید.

• در صورت لزوم، برای کاهش pH از اسید کلریدریک (HCl) و برای افزایش pH از سدیم هیدروکسید (NaOH) استفاده کنید.

۵. استریل‌سازی (در صورت نیاز):

• اگر از PBS برای کشت سلولی یا کاربردهای استریل استفاده می‌کنید، محلول را به یکی از روش‌های زیر استریل کنید:

  • اتوکلاو کردن در دمای ۱۲۱ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۰ دقیقه

  • فیلتراسیون استریل با استفاده از فیلتر ۰.۲۲ میکرومتری

۶. نگهداری:

• محلول ۱X PBS را می‌توان در دمای اتاق یا برای نگهداری طولانی‌مدت، در یخچال (۴ درجه سانتی‌گراد) ذخیره کرد.

• در محلول‌های غلیظ (مانند ۱۰X PBS)، ممکن است رسوب تشکیل شود که قبل از استفاده باید در دمای اتاق گرم شده و کاملاً حل شود.

کاربردهای رایج محلول PBS:

• شستشوی سلول‌ها در کشت‌های سلولی

• رقیق‌سازی مواد (مانند آنتی‌بادی‌ها و پروتئین‌ها)

• شستشوی تجهیزات آزمایشگاهی

• حفظ pH در آزمایش‌های بیولوژیکی

• آب‌گیری مجدد نمونه‌ها قبل از آنالیز

بخش چهارم: نکات کلیدی و ملاحظات مهم

• استریل‌سازی:

  • برای کاربردهای کشت سلول و سایر آزمایش‌های حساس، استریل کردن PBS ضروری است.

  • استریل‌سازی را می‌توان با اتوکلاو یا فیلتراسیون انجام داد.

• نگهداری:

  • محلول PBS را می‌توان در دمای اتاق یا یخچال نگهداری کرد.

  • برای نگهداری طولانی‌مدت، محلول را در فریزر نگهداری کنید.

  • از آلوده شدن محلول جلوگیری شود.

• ملاحظات خاص:

  • برخی از فرمول‌های PBS حاوی کلسیم و منیزیم هستند که برای برخی کاربردها ضروری است.

  • برای کاربردهای خاص، ممکن است نیاز به تنظیم غلظت یا pH PBS باشد.

  • در صورت رسوب کردن نمک ها در دماهای پایین، باید صبر کرد تا محلول به دمای محیط برسد و رسوبات حل شوند.

نکات اضافی برای تهیه PBS:

• همیشه سعی کنید بافر را در دمایی نزدیک به دمای مصرف آن تهیه کنید، زیرا تغییرات دما می‌تواند باعث تغییر در تفکیک یون‌ها شود.

• pH مترها را به درستی کالیبره کنید تا اندازه‌گیری دقیقی داشته باشید.

• در شرایط استریل و آسپتیک کار کنید تا از آلودگی‌های میکروبی جلوگیری شود. PBS به دلیل داشتن فسفات و pH خنثی، مستعد رشد میکروب‌ها است.

• اگر PBS 10X تهیه می‌کنید، می‌توانید ۱۰۰ میلی‌لیتر از این محلول را با ۹۰۰ میلی‌لیتر آب مقطر رقیق کنید تا PBS 1X به دست آورید.

روش تهیه PBS

۱. روش‌های مختلف تهیه PBS

روش‌های متعددی برای تهیه PBS وجود دارد که از جمله مهم‌ترین آن‌ها می‌توان به محلول‌های Dulbecco's PBS (DPBS) و پروتکل Cold Spring Harbor اشاره کرد. برخی فرمول‌های DPBS فاقد پتاسیم و منیزیم هستند، در حالی که برخی دیگر بسته به استفاده برای بافت زنده یا تثبیت‌شده، حاوی CaCl₂ و MgCl₂ می‌باشند.

۲. فرمولاسیون DPBS ۱×

الف) فرمول DPBS ۱× بدون کلسیم و منیزیم

• Na₂HPO₄: ۸.۱ میلی‌مولار (۱.۱۵ گرم در لیتر)

• KH₂PO₄: ۱.۵ میلی‌مولار (۰.۲ گرم در لیتر)

• NaCl: ۱۳۷ میلی‌مولار (۸.۰ گرم در لیتر)

• KCl: ۲.۷ میلی‌مولار (۰.۲ گرم در لیتر)

ب) فرمول DPBS ۱× با کلسیم و منیزیم

• Na₂HPO₄: ۸.۱ میلی‌مولار (۱.۱۵ گرم در لیتر)

• KH₂PO₄: ۱.۵ میلی‌مولار (۰.۲ گرم در لیتر)

• NaCl: ۱۳۷ میلی‌مولار (۸.۰ گرم در لیتر)

• KCl: ۲.۷ میلی‌مولار (۰.۲ گرم در لیتر)

• CaCl₂: ۰.۹ میلی‌مولار (۰.۱ گرم در لیتر)

• MgCl₂: ۰.۵ میلی‌مولار (۰.۱ گرم در لیتر)

۳. پروتکل Cold Spring Harbor

در این روش، مقدار مشخصی از ترکیبات مورد نیاز را در ۸۰۰ میلی‌لیتر آب مقطر حل کرده و سپس حجم نهایی را به ۱ لیتر می‌رسانند.

۴. تنظیم pH

pH نهایی PBS معمولاً حدود ۷.۴ است. هنگام تهیه محلول‌های بافری، بهتر است مقدار pH را مستقیماً با استفاده از pH متر اندازه‌گیری کنید. در صورت لزوم، می‌توان مقدار آن را با افزودن هیدروکلریک اسید (HCl) یا سدیم هیدروکسید (NaOH) تنظیم کرد.

5. تأثیر قدرت یونی و دما بر pH

pKa فسفات به شدت وابسته به قدرت یونی و دما است.

• افزایش دما باعث کاهش pKa و در نتیجه کاهش pH محلول می‌شود.

• در ۲۵ درجه سانتی‌گراد، مقدار pKa₂ تقریباً ۷.۱۸ است.

• در ۳۷ درجه سانتی‌گراد، مقدار pKa₂ حدود ۷.۱۵ است.

• این تغییرات باید هنگام استفاده از PBS در محیط‌های حساس مانند کشت سلولی، در نظر گرفته شوند.

بخش پنجم: مزایای خرید قرص PBS از آریاطب

• کیفیت بالا:

  • آریاطب قرص‌های بافر PBS با کیفیت بالا و مطابق با استانداردهای بین‌المللی ارائه می‌دهد.

• تنوع محصولات:

  • این فروشگاه انواع قرص‌های PBS با غلظت‌ها و فرمول‌های مختلف را عرضه می‌کند.

• قیمت مناسب:

  • آریاطب قرص‌های PBS را با قیمت مناسب و رقابتی ارائه می‌دهد.

• خدمات مشتریان:

  • این فروشگاه خدمات مشتریان حرفه‌ای و پاسخگو ارائه می‌دهد.

• دسترسی آسان:

  • خرید به صورت آنلاین از سایت آریاطب به آسانی انجام می‌شود.

نتیجه‌گیری:

قرص بافر فسفات سالین (PBS) یک ابزار ضروری در تحقیقات زیستی و بیوشیمیایی است. استفاده از قرص‌های بافر PBS، تهیه محلول را سریع، آسان و دقیق می‌کند. آریاطب با ارائه قرص‌های PBS با کیفیت بالا و خدمات مشتریان حرفه‌ای، نیازهای محققان و آزمایشگاه‌ها را برآورده می‌کند.