محلول تریپسین

محلول تریپسین: کلید جدا کردن سلول‌ها از سطح کشت

تریپسین یک آنزیم پروتئولیتیک است که به طور گسترده در زیست‌شناسی سلولی برای جدا کردن سلول‌های چسبنده از سطح ظرف کشت استفاده می‌شود. این آنزیم با شکستن پیوندهای پروتئینی که سلول‌ها را به یکدیگر یا به سطح ظرف متصل می‌کنند، باعث جدا شدن سلول‌ها می‌شود.

چرا از تریپسین استفاده می‌کنیم؟

• پاساژ سلولی: برای تکثیر سلول‌ها در ظروف کشت جدید، ابتدا باید سلول‌های چسبنده را از ظرف قدیمی جدا کرد. تریپسین این کار را به صورت ملایم و موثر انجام می‌دهد.

• تهیه سلول‌های تک سلولی: در بسیاری از آزمایش‌ها، نیاز به یک سوسپانسیون از سلول‌های تک سلولی است. تریپسین با جدا کردن سلول‌ها از یکدیگر، این نیاز را برطرف می‌کند.

• تجزیه بافت‌ها: تریپسین می‌تواند برای تجزیه بافت‌های اولیه و تهیه سلول‌های تک هسته‌ای نیز استفاده شود.

مکانیسم عمل تریپسین

تریپسین با شکستن پیوندهای پپتیدی در ناحیه کربوکسیل اسیدهای آمینه لیزین و آرژنین، پروتئین‌های غشایی را که سلول‌ها را به یکدیگر یا به سطح ظرف متصل می‌کنند، تجزیه می‌کند.

اجزای محلول تریپسین

محلول تریپسین معمولاً حاوی موارد زیر است:

• تریپسین: آنزیم اصلی که عمل تجزیه پروتئین‌ها را انجام می‌دهد.

• EDTA (Ethylenediaminetetraacetic acid): یک عامل شلاته‌کننده است که یون‌های کلسیم و منیزیم را که برای اتصال سلول‌ها به یکدیگر ضروری هستند، شلاته می‌کند و به این ترتیب به عمل تریپسین کمک می‌کند.

• بافر: برای حفظ pH محلول در محدوده مناسب برای فعالیت آنزیم تریپسین.

نحوه استفاده از محلول تریپسین

1. شستشوی سلول‌ها: ابتدا محیط کشت قدیمی را از ظرف کشت خارج کرده و سلول‌ها را با PBS (Phosphate Buffered Saline) شستشو دهید.

2. اضافه کردن تریپسین: حجم مشخصی از محلول تریپسین را به ظرف کشت اضافه کرده و به مدت چند دقیقه (معمولاً 1-5 دقیقه) در انکوباتور قرار دهید تا سلول‌ها از سطح ظرف جدا شوند.

3. خنثی‌سازی تریپسین: پس از جدا شدن سلول‌ها، محیط حاوی سلول و تریپسین را به یک لوله سانتریفیوژ منتقل کرده و با اضافه کردن محیط کشت حاوی سرم، فعالیت تریپسین را خنثی کنید. سرم حاوی پروتئین‌هایی است که به تریپسین متصل شده و فعالیت آن را مهار می‌کنند.

4. سانتریفیوژ: مخلوط را سانتریفیوژ کرده تا سلول‌ها رسوب کنند.

5. رسوب سلولی: پس از سانتریفیوژ، مایع رویی را دور ریخته و به رسوب سلولی محیط کشت تازه اضافه کنید.

نکات مهم در استفاده از تریپسین

• غلظت تریپسین: غلظت مناسب تریپسین به نوع سلول، سن کشت و سطح چسبندگی سلول‌ها بستگی دارد. استفاده از غلظت بیش از حد تریپسین می‌تواند به سلول‌ها آسیب برساند.

• زمان تماس: زمان تماس تریپسین با سلول‌ها نیز بسیار مهم است. تماس طولانی مدت با تریپسین می‌تواند به سلول‌ها آسیب برساند.

• دما: تریپسین در دمای اتاق یا دمای ۳۷ درجه سانتی‌گراد فعال‌تر است.

• pH: pH مناسب برای فعالیت تریپسین حدود ۸ است.

توجه: استفاده از تریپسین نیاز به دقت و تجربه دارد. برای اطمینان از جدا شدن صحیح سلول‌ها و جلوگیری از آسیب به آن‌ها، بهتر است دستورالعمل‌های سازنده را به دقت مطالعه کنید.