محیط کشت انتقال و نگهداری ویروس

محیط کشت Viral Transport Media

محیط کشت VTM مخفف محیط کشت Viral Transport Media یک محیط انتقال مواد مغذی (VTM) است که برای انتقال و حفظ قابلیت زنده ماندن نمونه ها (ویروس ها) در آزمایشگاه برای شناسایی و پردازش نمونه بعدی استفاده می شود.

عوامل حمل و نقل به ویژه برای ویروس ها مهم هستند زیرا آنها در برابر سایر عوامل عفونی حساس تر هستند.
احتمال جداسازی موفقیت آمیز زمانی افزایش می یابد که فاصله زمانی بین جمع آوری و تلقیح کشت کوتاهتر باشد و زمانی که نمونه حاوی ذرات ویروس بیشتری باشد.
برای به حداکثر رساندن میزان ویروس در نمونه، جمع آوری باید در اوایل بیماری بیمار انجام شود.
در صورت استفاده از روش انتقال مناسب می توان به جداسازی موفق و ایمن ویروس دست یافت.
هنگامی که نمونه های ویروسی به آزمایشگاه محلی یا آزمایشگاه مرجع ارسال می شوند، تعداد جدایه ها نیز افزایش می یابد.

محیط کشت VTM

طرز تهیه  محیط کشت Viral Transport Media

فعالیت ویروسی را حتی در دمای اتاق حفظ می کند.
برای کشت سلولی غیر سمی است و ظاهر اثرات سیتوپاتیک ویروسی را پنهان نمی کند.
ماندگاری طولانی خواهد داشت (هم منجمد و هم منجمد).
این می تواند هم برای جدایه های کشت و هم برای آزمایش های مستقیم مانند سنجش آنزیمی یا سنجش ایمونوفلورسانس استفاده شود.
برای دستیابی به تمام موارد فوق، رسانه های انتقال ویروس معمولاً حاوی یک جزء پروتئینی محافظ، عوامل ضد میکروبی برای جلوگیری از آلودگی و بافرهایی هستند که pH محلول را حفظ می کنند.
برخی از VTM ها همچنین حاوی یون ها و مواد معدنی اضافی هستند که به حفظ دوام این نمونه ها کمک می کند.

روش آماده سازی محیط کشت VTM های  برای سواب های بینی و گلو از انسان

10 گرم آب پرفیوژن گوساله و 2 گرم کسر آلبومین گاوی را به آب مقطر استریل (تا 400 میلی لیتر) اضافه کنید.
0.8 میلی لیتر محلول سولفات جنتامایسین (50 میلی گرم در میلی لیتر) و 3.2 میلی لیتر آمفوتریسین B (250 میکروگرم در میلی لیتر) اضافه کنید -
با فیلتراسیون استریل کنید.
در اینجا یک راه دقیق تر برای دریافت VTM بیشتر برای انسان ها وجود دارد:

500 میلی لیتر سرم جنین گاوی (FBS) را با حرارت دادن به مدت 30 دقیقه در حمام آب در دمای 56.0 درجه سانتیگراد +/- 1.0 درجه سانتیگراد غیرفعال کنید. در صورت وجود از FBS غیرفعال شده تجاری استفاده کنید.

50 میلی لیتر آمفوتریسین B اضافه کنید، 50 میلی لیتر جنتامایسین را به FBS غیر فعال اضافه کنید، سپس محلول را از طریق یک واحد فیلتر 0.20-0.45 میکرومتر (واحد فیلتر 150 میلی لیتر) فیلتر کنید.
10 میلی لیتر FBS را به 500 میلی لیتر محلول نمک متعادل هنکس (HBSS) اضافه کنید.
2 میلی لیتر از مخلوط جنتامایسین/آمفوتریسین B را به HBSS FBS از پیش ساخته شده اضافه کنید.
محلول ها و ویال ها را توزیع کنید. با برعکس کردن بطری مخلوط کنید.
روی بطری تاریخ ساخت، مواد افزودنی و تاریخ انقضا برچسب بزنید.
3 میلی لیتر از محیط را در لوله های پیچی مخروطی استریل جداگانه (مانند لوله های 100×16 میلی متر) اندازه گیری کنید. پس از توزیع درب، آن را محکم بسته نگه دارید. ظروف را با اطلاعات لازم برچسب بزنید.
در دمای 8-2 درجه سانتی گراد نگهداری شود.

روش آماده سازی محیط کشت VTM  برای نمونه از حیوانات:

برای جمع آوری و انتقال نمونه های حیوانی می توان از دو نوع VTM استفاده کرد.
199 واسطه های حمل و نقل به طور گسترده ای برای جمع آوری و انتقال نمونه های بالینی از همه گونه ها استفاده می شود.
محیط دوم، با انتقال PBS-گلیسرول، که یک محیط مبتنی بر گلیسرول است، پایداری طولانی مدت را برای نمونه هایی که اجازه خنک شدن فوری را نمی دهند، فراهم می کند.
برای تلقیح تخم مرغ مناسب است اما برای تلقیح کشت بافت مناسب نیست