محیط کشت آلکالین سالین پپتون واتر

محیط کشت آلکالین سالین پپتون واتر (ASPW)

محیط کشت آلکالین سالین پپتون واتر (Alkaline Saline Peptone Water) یا به اختصار ASPW یک محیط کشت مایع است که به طور ویژه برای غنی‌سازی باکتری‌های جنس ویبریو (Vibrio) طراحی شده است. این باکتری‌ها معمولاً در آب‌های شور و لب‌شور یافت می‌شوند و برخی گونه‌های آن‌ها مانند ویبریو کلرا عامل بیماری وبا هستند. محیط قلیایی و نمکی این محیط کشت شرایط ایدئالی را برای رشد و تکثیر ویبریوها فراهم می‌کند.

ترکیبات

• پپتون: منبع اصلی نیتروژن، کربن و مواد مغذی برای رشد باکتری‌ها است.

• نمک طعام (NaCl): ایجاد محیط شور و قلیایی برای رشد ویبریوها

• آب مقطر: حلال و محیطی برای رشد باکتری‌ها فراهم می‌کند.

• بافر: برای حفظ pH قلیایی محیط

کاربردها

• غنی‌سازی ویبریو: این محیط کشت به عنوان یک محیط غنی‌سازی اولیه برای جداسازی ویبریو از نمونه‌های بالینی (مانند مدفوع)، مواد غذایی (مانند غذاهای دریایی) و نمونه‌های محیطی (مانند آب دریا) استفاده می‌شود.

• آزمایش‌های بعدی: پس از غنی‌سازی در محیط ASPW، می‌توان از کشت‌های خالص برای انجام آزمایش‌های بیوشیمیایی و سرولوژیکی جهت شناسایی دقیق گونه‌های ویبریو استفاده کرد.

نحوه تهیه

1. توزین: مقدار مشخصی از پپتون، نمک و بافر را در یک ارلن مایر وزن کنید.

2. حل کردن: مواد را در آب مقطر حل کرده و حجم را به مقدار مشخص برسانید.

3. تنظیم pH: pH محیط را به حدود 8.5 برسانید.

4. اتوکلاو: محیط کشت را به مدت 15 دقیقه در دمای 121 درجه سانتی‌گراد اتوکلاو کنید.

5. توزیع: محیط کشت استریل شده را در لوله‌های آزمایش یا ظروف دیگر توزیع کنید.

روش انجام آزمایش

1. کشت: نمونه مورد نظر (مثلاً مدفوع، آب دریا) را در محیط ASPW کشت دهید.

2. انکوباسیون: لوله‌های کشت را به مدت 18-24 ساعت در دمای 35 درجه سانتی‌گراد انکوبه کنید.

3. مشاهده: پس از انکوباسیون، لوله‌ها را به لحاظ وجود کدورت بررسی کنید. کدورت نشان‌دهنده رشد باکتری‌ها است.

4. کشت در محیط‌های انتخابی: برای جداسازی کلنی‌های خالص ویبریو، می‌توان از محیط‌های انتخابی مانند محیط کشت تایوسولفات سیترات بیلین (TCBS) استفاده کرد.

مزایای استفاده از محیط کشت ASPW

• سادگی: تهیه و استفاده از این محیط کشت بسیار ساده است.

• گزینه مناسب برای ویبریو: شرایط قلیایی و نمکی این محیط برای رشد ویبریو بسیار مناسب است.

• غنی‌سازی موثر: این محیط به افزایش تعداد ویبریوهای موجود در نمونه کمک می‌کند.

محدودیت‌ها

• غیر انتخابی: این محیط کشت برای جداسازی ویبریو از سایر باکتری‌ها انتخابی نیست.

• نیاز به محیط‌های انتخابی: برای جداسازی کلنی‌های خالص ویبریو، نیاز به استفاده از محیط‌های انتخابی مانند TCBS است.

نکات مهم

• pH: تنظیم دقیق pH بسیار مهم است، زیرا pH قلیایی برای رشد ویبریو ضروری است.

• استریلیزاسیون: محیط کشت باید به طور کامل استریل شود تا از آلودگی جلوگیری شود.

• انکوباسیون: دمای انکوباسیون مناسب برای رشد ویبریو 35 درجه سانتی‌گراد است.

جمع‌بندی

محیط کشت ASPW یک ابزار ضروری برای جداسازی و غنی‌سازی ویبریو از نمونه‌های مختلف است. این محیط کشت به دلیل سادگی، هزینه کم و کارایی بالا، به طور گسترده در آزمایشگاه‌های میکروبیولوژی استفاده می‌شود.