محیط کشت پی وای آر PVR آگار

محیط کشت پی وای آر آگار PYR agar

محیط کشت پی وی آر آگار یک محیط مایع می باشد که به منظور استفاده در روش های کیفی برای شناسایی سریع و احتمالی استرپتوکوک ها و انتروکوک های گروه A توصیه می شود.

صفحه آگار چیست؟

صفحه آگار در محیط کشت پی وی آر آگار ، یک ظرف پتری است که حاوی آگار به عنوان یک محیط کشت جامد به علاوه مواد مغذی است که برای کشت میکرو ارگانیسم ها استفاده می شود. بعضی اوقات ترکیبات انتخابی برای تأثیر در رشد مانند آنتی بیوتیک ها اضافه می شوند.

در محیط کشت پی وای آر آگار میکرو ارگانیسم های جداگانه ای که روی صفحه قرار می گیرند به کلنی های جداگانه تبدیل می شوند، هر یک کلون از نظر ژنتیکی با ارگانیسم جداگانه یکسان است (به جز نرخ جهش کم و اجتناب ناپذیر). بنابراین، می توان از صفحه برای برآورد غلظت موجودات در یک فرهنگ مایع یا رقت مناسب آن فرهنگ با استفاده از شمارنده کلنی، یا برای تولید فرهنگ های خالص ژنتیکی از یک فرهنگ مخلوط از ارگانیسم های مختلف استفاده نمود.

روش های مختلفی برای تهیه سلول ها در محیط کشت پی وی آر آگار در دسترس است. یک تکنیک به عنوان خط کشی شناخته می شود. در این تکنیک، قطره ای از فرهنگ در انتهای یک حلقه سیم نازک و استریل، که بعضاً به عنوان تلقیح کننده شناخته می شود، در سطح محیط کشت پی وی آر آگار رها می شود و ارگانیسم ها را پشت سر می گذارد، تعداد بیشتری در ابتدای رگه و تعداد پایین در پایان. در برهه ای از طی یک رگه موفق، تعداد موجودات رسوب یافته به حدی خواهد بود که کلنی های مجزا در آن منطقه رشد می کنند که ممکن است برای کشت بیشتر در محیط کشت پی وی آر آگار برداشته شوند.

خلاصه و توضیح:

آزمایش هیدرولیز L-pyroglutamic و acid-β-naphthylamide (PYR)  برای اولین بار در سال 1970 توسط Mulczyk و Szewczuk شرح داده شد. کوکسی مثبت در سال 1981 ، گودزی و همکاران بستر محیط کشت پی وای آر آگار را در یک آبگوشت تاد هیویت گنجانیده و بعد از انکوباسیون شبانه فعالیت آنزیمی استرپتوکوک ها را آزمایش کرد. بستر محیط کشت پی وای آر آگار را در یک آبگوشت قرار داده و پس از 4 ساعت انکوباسیون با موفقیت از نظر فعالیت آنزیم آزمایش شده است. گزارش شده است که آزمایش محیط کشت پی وای آر آگار حساس و خاص تر از آزمایش روتین باسیتراسین برای شناسایی استرپتوکوک های گروه A است، در حالی که با نمک آگار نیز قابل مقایسه است.

اصل پپتون:

در محیط کشت پی وی آر آگار پروتئین کازئین فاکتورهای اصلی رشد و عناصر کمیاب را تأمین می کند. سدیم کلراید تعادل اسمزی را حفظ می کند. S. pyogenes و Enterococcus spp.  دارای آنزیم L- پیرولیدونیل آمینوپپتیداز است که با تشکیل یک β- نفتیلامین آزاد ، بستر L-pyroglutamic acid-β-naphthylamide (PYR)  را هیدرولیز می کند. اگر این آمین در محیط کشت پی وی آر آگار با معرف سینامالدئید که به آن افزوده می شود ترکیب می شود، یک محصول نهایی قرمز روشن ایجاد می کند.

روش :

1. روش های مناسب را برای بررسی اینکه محیط کشت پی وی آر آگار ایزوله آزمایش استرپتوکوک یا انتروکوک است، اجرا کنید.

2. آبگوشت محیط کشت پی وی آر آگار را با استفاده از 3 تا 5 کلنی از یک کشت خالص ، 24-28 ساعته تلقیح کنید.

3. به مدت 4 ساعت از نظر هوازی در محیط کشت پی وی آر آگار در دمای 33-37 درجه سانتی گراد انکوباسیون کنید.

4. بعد از جوجه کشی در محیط کشت پی وی آر آگار، 1-2 قطره معرف PYR (REF R21258)  به لوله اضافه کنید.

5. در عرض 2-1 دقیقه شاهد ایجاد رنگ قرمز باشید.

تفسیر آزمون :

آزمون مثبت در محیط کشت پی وی آر آگار : توسعه رنگ قرمز

آزمایش منفی در محیط کشت پی وی آر آگار : توسعه رنگ زرد

کنترل کیفیت :

تعداد زیادی از محیط کشت پی وی آر آگار با استفاده از ارگانیسم های کنترل کیفیت آزمایش شده و قابل قبول شناخته شده است. آزمایش ارگانیسم های کنترل باید مطابق با روش های کنترل کیفیت آزمایشگاهی تعیین شده انجام شود. در صورت مشاهده نتایج کنترل کیفی نادرست، نتایج بیمار نباید گزارش شود.

محدودیت ها در محیط کشت پی وی آر آگار :

یک آزمایش محیط کشت پی وی آر آگار مثبت احتمال بالایی را برای شناسایی احتمالی انتروکوک و S. pyogenes فراهم می کند. با این حال، ارگانیسم های دیگر، از جمله کوک های گرم مثبت، ممکن است PYR را هیدرولیز کنند. برای شناسایی نهایی ممکن است آزمایش بیوشیمیایی بیشتری در محیط کشت پی وی آر آگار لازم باشد. در صورت لزوم با منابع مناسب مشورت کنید.

موارد استفاده از تست PYR :

برای شناسایی احتمالی استرپتوکوک های گروه A (Streptococcus pyogenes)  استفاده می شود.

محیط کشت پی وی آر آگار برای تمایز سریع انتروکوک ها از استرپتوکوک های همولیتیک گروه D استفاده می شود.

همچنین برخی از استافیلوکوک ها (همولیتیکوس مثبت از S. auricularis منفی) را متمایز می کند.

محیط کشت پی وی آر آگار در شناسایی E. coli استفاده می شود و آن را از سایر میله های گرم منفی ایندول مثبت ، لاکتوز مثبت جدا می کند.

روش دیسک (سریع) :

دیسک آزمایش PYR را روی نوار با 10 میکرولیتر آب مقطر استریل یا آب دیونیزه مرطوب کنید.

توجه: دیسک را غرق نکنید.

 5-10 کلنی از کرنش آزمایش شده را از طریق کشت در محیط کشت پی وی آر آگار 18-24 ساعته با حلقه روی سطح دیسک قرار دهید و آنها را کمی روی آن آغشته کنید.

 دیسک را به مدت 1-2 دقیقه در دمای اتاق انکوب کنید.

 بعد از انکوباسیون ، 1 قطره N ، N-dimethylaminocinnamaldehyde اضافه کنید.

 در عرض 1-2 دقیقه از رشد رنگ قرمز استفاده کنید.